05/09/2022

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免疫组织化学

免疫组织化学 (IHC) 是一种免疫染色形式，涉及使用抗体来识别抗原组织样本中的组织样本。结果的可视化可以使用显色免疫组织化学（光可视化）或免疫荧光（荧光可视化）来完成。

免疫组织化学所需的各个步骤和试剂可能有很大差异，并且取决于特定的样本和目标抗原。但是，进行免疫组织化学时有两个主要步骤：样本制备和样本标记。

在制备样本时，组织被固定以防止任何降解或其他变化，并切片或切片以更容易可视化。

对于样品标记，必须选择合适的抗体和 IHC 报告基因。可以直接或间接检测目标抗原。直接检测涉及使用单步染色方法，其中添加标记抗体并与目标抗原结合。间接检测涉及使用两步染色方法，其中添加一抗并与目标抗原结合。然后，标记的二抗与一抗结合。

免疫荧光

免疫荧光 (IF) 是一种用于可视化荧光染料标记抗体结合的目标抗原的技术。 IF 可用于组织样本、培养细胞线或单个细胞。荧光团可以直接与抗体缀合，也可以与与抗体结合的抗原缀合。使用的抗体和荧光团不应干扰目标抗原的结合能力，并且取决于样品和目标抗原。

免疫荧光检测有两种主要方法：初级（或直接）和次级（或间接）。初级检测使用与荧光团结合的一抗，然后该抗体识别感兴趣抗原上的表位，并可以使用荧光显微镜进行可视化。二次检测使用两种抗体进行检测。第一抗体对靶抗原具有特异性，第二抗体是荧光团缀合的且对第一抗体具有特异性。然后可以使用荧光显微镜观察抗原-抗体-抗体-荧光团复合物。

免疫沉淀

免疫沉淀 (IP) 是一种通过与固体基质偶联的抗体结合从溶液中沉淀出感兴趣抗原的技术。有不同类型的针对不同类型蛋白质或其他分子的 IP。单个蛋白质 IP 针对溶液中的一种特定蛋白质（通常含有其他蛋白质）。蛋白质复合物免疫沉淀 (Co-IP) 针对蛋白质复合物而不是单个蛋白质。染色质免疫沉淀 (ChIP) 用于在体内检测目标蛋白质 DNA 结合位点的位置。RNP 免疫沉淀 (RIP) 用于检测 RNA 上的核糖核蛋白 (RNP)。免疫沉淀有两种主要方法： D直接或间接。直接法使用固定在对目标蛋白具有特异性的固体基质上的抗体来收集目标蛋白。间接方法使用对目标蛋白具有特异性的抗体，但可自由添加到样品中。随后，添加蛋白 A/G 连接的珠子，该珠子可结合抗体和靶蛋白。在这两种方法中，通常都必须通过离心（使用琼脂糖珠）或磁场（使用超顺磁珠）分离固体底物（含有目标蛋白质）。

蛋白质印迹

蛋白质印迹 (WB) 是一种用于检测和鉴定样品中特定蛋白质的技术。 （不要与用于 DNA 检测的 Southern 印迹和用于 RNA 检测的 Northern 印迹混淆。）Western 印迹的过程包括三个主要部分：分离感兴趣的特定蛋白质、转移到固体基质以及用抗体标记目标蛋白以进行视觉检测。化。第一步，使用凝胶电泳（通常是 SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳 (SDS-PAGE)）分离样品中的蛋白质。分离后，凝胶中的蛋白质以与凝胶上相同的布局转移到膜（通常是硝基纤维素或 PVDF）上。在最后一步，标记和可视化，通常使用间接方法。在与结合目标蛋白的一抗一起孵育之前，将膜封闭以防止任何非特异性结合。洗涤步骤后，添加与一抗特异性检测分子缀合的二抗。通过比色、化学发光或放射性方法实现检测和可视化。

ELISA

酶联免疫吸附测定 (ELISA) 是一种常见的检测和定量分析样品中分析物的量。ELISA 有四种主要类型，但它们都利用抗体-抗原相互作用进行检测和定量。夹心格式因其高特异性和灵敏度而最受欢迎。夹心格式涉及将目标抗原\"夹在”配对的两个抗体之间。其他类型包括直接 ELISA、间接 ELISA 和竞争性抑制 ELISA。在直接 ELISA 中，仅使用一种抗体来检测与孔结合的目标抗原。抗体与检测分子结合。在间接 ELISA 中，有一个两步检测方法，其中一抗与蚂蚁结合感兴趣的基因，与检测分子缀合的二抗与一抗结合。竞争性抑制 ELISA 通过测量与抑制剂抗原的竞争水平提供相反的结果。同时添加目标抗原和抑制抗原，但只有抑制抗原可以被检测分子结合，从而被检测到。因此，竞争性抑制 ELISA 的检测水平越高，目标分析物的量就越低。

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流式细胞术

流式细胞术 (FCM) 是一种用于根据特征或附加标签检测和分析细胞群或其他颗粒的技术。该技术需要流式细胞仪。细胞或其他颗粒样品悬浮在液体介质中并插入仪器中。流式细胞仪一次流过一个细胞或颗粒通过激光束进行检测和分类。当细胞或颗粒通过光束发送时，光被散射以区分细胞或颗粒的特性。如果细胞或颗粒被荧光标记标记，那么激光束也会以不同的波长发射。收集数据并进行进一步分析。

细胞内流式细胞仪

细胞内流式细胞术细胞计数 (ICFCM) 与流式细胞术类似，但用于分析细胞内的分子，例如磷酸化信号蛋白或细胞因子。为了标记和可视化细胞内的蛋白质，应使用蛋白质转运抑制剂处理样品中的细胞，然后将其固定在悬浮液中并进行透化，然后添加带有荧光团的检测抗体。随后，可以使用流式细胞仪对样本进行分析。

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